Состав среды 9

Микробиологическое исследование - это выделение чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучение их свойств. Чистыми называют культуры, состоящие из микроорганизмов одного вида. Они нужны при диагностике инфекционных болезней, для определения видовой и типовой принадлежности микробов, в исследовательской работе, для получения продуктов жизнедеятельности микробов токсинов, антибиотиков, вакцин и т.

Для культивирования микроорганизмов выращивание в искусственных условиях in vitro необходимы особые субстраты - питательные среды. На средах микроорганизмы осуществляют все жизненные процессы питаются, дышат, размножаются и т. Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Среды должны создавать оптимальные наилучшие условия для жизнедеятельности микробов. Ими являются источники органогенов и минеральных неорганических веществ, включая микроэлементы.

Минеральные вещества не только входят в структуру клетки и активизируют ферменты, но и определяют физико-химические свойства сред осмотическое давление, рН и др. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста - витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать;. Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда рН 7,,4.

Исключение составляют холерный вибрион - его оптимум находится в щелочной зоне рН 8,,0 и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции рН 6,,8. Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили рН, среды должны обладать буферностью, т. Этот потенциал показывает насыщение среды кислородом. Для одних микроорганизмов нужен высокий потенциал, для других - низкий. Например, анаэробы размножаются при RH 2 не выше 5, а аэробы - при RH 2 не ниже Окислительно-восстановительный потенциал большинства сред удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных анаэробов;.

Желательно, чтобы среды были прозрачными - удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами. Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова.

Это исключает возможность создания универсальной среды. Кроме того, на выбор той или иной среды влияют цели исследования. По исходным компонентам различают натуральные и синтетические среды. Натуральные среды готовят из продуктов животного и растительного происхождения. В настоящее; время разработаны среды, в которых ценные пищевые продукты мясо и др.

Несмотря на то что состав питательных сред из натуральных продуктов очень сложен и меняется в зависимости от исходного сырья, эти среды нашли широкое применение. Синтетические среды готовят из определенных химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в дважды дистиллированной воде. Важное преимущество этих сред в том, что состав их постоянен известно, сколько и какие вещества в них входят , поэтому эти среды легко воспроизводимы.

Среды бывают жидкие, плотные и полужидкие. Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар или желатин. Агар-агар - полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды.

Желатин - белок животного происхождения. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и они плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество - при их росте среда разжижается.

Кроме того, в качестве плотных сред применяют свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель, среды с селикагелем. Среды делят на простые и сложные. К первым относят мясопептонный бульон МПБ , мясопептонный агар МПА , бульон и агар Хоттингера, питательный желатин и пептонную воду.

Сложные среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма. Это вышеупомянутые МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода;. Например, для культивирования стрептококка к средам прибавляют сахар, для пневмо- и менингококков - сыворотку крови, для возбудителя коклюша - кровь;. Так, соли желчных кислот, подавляя рост кишечной палочки, делают среду элективной для возбудителя брюшного тифа.

Среды становятся элективными при добавлении к ним определенных антибиотиков, солей, изменении рН. Жидкие элективные среды называют средами накопления. Примером такой среды служит пептонная вода с рН 8,0. При таком рН на ней активно размножается холерный вибрион, а другие микроорганизмы не растут;. При росте микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется цвет среды;. Пример такой среды - глицериновая смесь, используемая для сбора испражнений при исследованиях, проводимых с целью обнаружения ряда кишечных бактерий.

Рецепты приготовления некоторых сред приведены в конце следующего раздела и во второй части учебника. Какие среды позволяют получить преимущественный рост одних микробов при одновременном подавлении других? Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке ее в ржавых кастрюлях.

Лучше всего пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Большие количества среды десятки и сотни литров готовят в специальных варочных котлах или реакторах рис. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Посудой, предназначенной для приготовления сред, нельзя пользоваться в других целях, например для хранения химических реактивов или дезинфицирующих растворов - даже следы этих веществ могут помешать росту микроорганизмов.

Исходным сырьем для приготовления большинства сред служат продукты животного или растительного происхождения: Основные питательные бульоны готовят на мясной воде или на различных переварах, полученных при кислотном или ферментативном гидролизе исходного сырья.

Бульоны из переваров в раз экономичнее, чем из мясной воды. Среды на переварах богаче аминокислотами, следовательно, питательнее; обладают большей буферностью, т. Кроме того, перевары можно готовить из заменителей мяса сгустков крови, плаценты, казеина и т. В настоящее время снабжение лабораторий мясной водой и переварами централизованно.

Чаще пользуются панкреатическим переваром Хоттингера, гидролизатами казеина или кормовых дрожжей. Из этих полуфабрикатов по определенным рецептам готовят необходимые среды.

Варят среды на открытом огне, водяной бане, в автоклаве или варочных котлах, подогреваемых паром. Установление рН сред ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек. Для точного определения рН пользуются потенциометром, применяя стеклянные электроды в соответствии с инструкцией или компаратором аппарат Михаэлиса , состоящим из штатива с гнездами для пробирок рис.

При приготовлении сред пользуются обычно индикатором метанитрофенолом, изменяющим свой цвет в диапазоне 6,,4. Для определения рН среды 4 пробирки, диаметр и цвет стекла которых не отличается от пробирок со стандартами, помещают в гнезда 1, 2, 3 и 5 см. В 1-ю и 3-ю пробирки наливают по 5 мл дистиллированной воды; в 5-ю - 7 мл; во 2-ю - 4 мл воды и 1 мл индикатора.

В гнезда 4 и 6 ставят стандарты нужного рН. В 1-ю, 2-ю и 3-ю пробирки наливают 2 мл охлажденной среды. Цвет жидкостей в пробирках сравнивают в проходящем свете, закрыв заднюю прорезь прибора фильтром матовым или синим, если жидкости интенсивно желтые. Готовя среды с заданным рН, в гнезде 4 и 6 ставят стандарты, рН которых близок к требуемому, а во 2-ю пробирку с испытуемой средой и индикатором добавляют из бюретки определенное количество раствора щелочи, если жидкость во 2-й пробирке светлее стандартов, или раствора кислоты - если светлее стандарты.

Щелочь или кислоту приливают до тех пор, пока цвет жидкости во 2-й пробирке не совпадает с цветом стандартов. Количество щелочи или кислоты , прибавленное к 2 мл среды во 2-й пробирке, пересчитывают на весь объем приготовленной среды.

Например, если для получения нужного рН на 2 мл среды пошло 2 капли 0,1 мл 0,05 н. При стерилизации рН сред снижается на 0,2, поэтому для получения среды с рН 7,,4 ее сначала готовят с рН 7,,6. Осветление сред производят, если при варке они мутнеют или темнеют. Свертываясь, белок увлекает в осадок взвешенные в среде частицы. Таким же способом можно вместо яичного белка использовать сыворотку крови мл на 1 л среды.

Фильтрацию жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или через матерчатые фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена, - они быстро застывают.

Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр в воронку помещают марлевую салфетку и на нее пышный комок ваты. Можно пользоваться бумажными или матерчатыми фильтрами, если проводить фильтрацию в горячем автоклаве или в воронках с подогревом. Фильтрацию агаровых сред можно заменить отстаиванием. Среду наливают в высокий цилиндрический сосуд и расплавляют в автоклаве. При медленном остывании среды в выключенном приборе взвешенные в ней частицы оседают на дно. На следующий день агаровый сгусток извлекают из сосуда для этого сосуд ненадолго помещают в горячую воду и отрезают ножом нижнюю часть со скопившимся осадком.

Верхнюю часть растапливают и разливают в соответствующие емкости. Среды, стерилизуемые при более низкой температуре, обязательно разливают в стерильную посуду. Разливают среды с помощью воронки, на конец которой надета резиновая трубка с зажимом Мора. Для мерного разлива применяют мензурки, бюретки, дозаторы, шприцы-пипетки и т.

Посуду со средой обычно закрывают ватно-марлевыми пробками, поверх которых надевают бумажные колпачки. Важно, чтобы при разливе среда не смачивала края посуды, иначе к ним могут прилипнуть пробки. К каждому сосуду обязательно прикрепляют этикетку с названием среды и датой ее приготовления. Режим стерилизации зависит от состава среды и указан в ее рецепте. Примерная схема режима стерилизации сред приведена в табл.

Если на средах не появятся признаки роста, их считают стерильными и передают для химического контроля по нескольку образцов каждой серии; б химический контроль: Химический контроль сред производят в химической лаборатории; в для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами микроорганизмов, и по их росту судят о питательных ростовых свойствах среды. К готовой среде прилагают этикетку и паспорт, в котором указывают название и состав среды, результаты контроля и др.

Хранят среды при комнатной температуре в шкафах, желательно специально для них предназначенных. Некоторые среды, например, среды с кровью и витаминами, хранят в холодильнике.

Изотонический раствор натрия хлорида. К 1 л дистиллированной воды добавляют 9 г натрия хлорида. Перевар Хоттингера разводят водой в раз в зависимости от того, какое количество аминного азота он содержит и какое его количество должно быть в бульоне указано в паспорте перевара и рецепте среды.

МПА можно варить в автоклаве или аппарате Коха. После его растворения разливают в стерильную посуду и стерилизуют текучим паром. Определяют температуру среды, поднося сосуд к шее у угла нижней челюсти. При нужной температуре должно быть терпимое ощущение горячего, но не ожога. После добавления крови, пока среда не застыла, содержимое сосуда тщательно перемешивают и разливают в чашки или пробирки. Среды с сывороткой крови готовят так же, как среды с кровью.

При инактивации разрушается вещество комплемент , губительно действующее на микробы. Можно стерильную желчь добавить к стерильной среде в асептических условиях. Разлив агаровых сред в чашки Петри. Обычно для чашки диаметром 9 см достаточно мл среды высота слоя 0,,3 см. Если слой выше, на нем менее контрастно выглядят колонии. При очень тонком слое резко ограничено количество питательных веществ и влаги среда быстро высыхает - ухудшаются условия культивирования.

Разливают среды в стерильные чашки в асептических условиях. Чашки ставят крышкой вверх. Сосуд со средой берут в правую руку, держа его у огня. Левой рукой вынимают пробку, зажав ее мизинцем и ладонью. Обжигают горлышко сосуда и двумя пальцами левой руки слегка приоткрывают крышку.

Вводят под нее горлышко флакона, не прикасаясь им к краю чашки. Наливая среду, следят чтобы она равномерно распределилась по дну чашки. Если при разливе на поверхности среды образуются пузырьки воздуха, к ним до того, как среда застынет, подносят пламя спички или горелки - пузырьки лопнут. Затем чашку закрывают и дают среде застыть.

Если посев производят в день разлива, среду необходимо подсушить. Для этого чашки в термостате осторожно открывают и устанавливают крышки и чашки открытой стороной вниз на мин. Если посев производят на следующий день после разлива, чашки, не подсушивая, завертывают в ту же бумагу, в которой их стерилизовали, и помещают в холодильник.

После того как среда застынет, пробирки ставят вертикально - дают стечь конденсату. Лучше употреблять свежескошенный агар. Пользоваться средой, в которой нет конденсата, нельзя. Ее следует снова растопить на водяной бане и скосить. Отечественная промышленность выпускает сухие среды разного назначения: Это порошки во флаконах с завинчивающимися крышками.

Хранят сухие среды в темном месте плотно закрытыми - они гигроскопичны. В лаборатории из порошков готовят среды по прописи на этикетке. Преимущество сухих сред по сравнению со средами, изготовленными в лаборатории, - стандартность их выпускают большими партиями , простота приготовления, делающая их доступными в любых даже походных условиях, стабильность, экономичность.

Важно, что их можно готовить из заменителей мяса: Каким должен быть рН сред для культивирования большинства патогенных микробов перед стерилизацией и почему? Приготовьте МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера с рН 7,,4, разлейте во флаконы и пробирки; простерилизуйте.

Классификация питательных сред

Приготовьте из сухих порошков среды Гисса, разлейте в пробирки по мл и простерилизуйте. Важным этапом бактериологического исследования является посев. В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют разные методы посева. Все они включают обязательную Цель: Поэтому работать следует быстро, но без резких движений, усиливающих колебания воздуха.

Во время посевов нельзя разговаривать. Посевы лучше делать в боксе. Не забывайте выполнять правила личной безопасности при работе с заразным материалом. Посев из пробирки в пробирку. Пробирку с посевным материалом и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Обычно пробирку с посевным материалом держат ближе к себе.

В правой руке, как писчее перо, держат бактериальную петлю, и стерилизуют ее, держа вертикально в пламени горелки. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают обе пробки одновременно. Извлекают пробки не рывком, а плавно - легкими винтовыми движениями. Вынув пробки, края пробирок обжигают в пламени горелки. Прокаленную петлю вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом, охлаждают и, набрав немного материала, осторожно переносят в пробирку со средой.

При посеве в жидкую среду посевной материал растирают на стенке пробирки над жидкостью и смывают средой. При посеве на жидкие среды тампоном его погружают в среду и с ополаскивают в ней. При посеве на плотную среду материал втирают в ее поверхность, вращая тампон, после чего тампон обеззараживают помещают в пробирку, в которой он был доставлен в лабораторию, и автоклавируют.

При посеве на скошенный агар материал обычно растирают на поверхности среды зигзагообразными движениями снизу вверх, начиная от границы конденсата.

При посеве на плотные среды, разлитые в пробирки столбиком, петлей с посевным материалом прокалывают столбик, производя так называемый посев "уколом".

После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя горелки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю. Посев жидкого материала можно производить стерильными пипетками пастеровскими или градуированными. После посева пипетки погружают в дезинфицирующую жидкость. Посевы во флаконы, матрацы и бутыли производят примерно так, как в пробирки, только сначала набирают материал петлей или в пипетку , а потом открывают сосуд со средой.

Посев на пробирки с чашки Петри. Изучив характер роста культуры на чашке, со стороны дна отмечают восковым карандашом нужный для посева участок. Чашку с посевным материалом ставят перед собой крышкой вверх. Левой рукой приоткрывают крышку и вводят под нее обожженную петлю. Остудив петлю, набирают посевной, материал с отмеченного участка. Вынимают петлю, закрывают чашку и в левую руку берут пробирку со средой. Посев производят так же, как с пробирки в пробирку.

После посева чашку поворачивают вверх дном. Посев на агар в чашки Петри. Шпатель - это стеклянная или металлическая трубочка, конец которой загнут в виде треугольника. Шпатель можно сделать из пастеровской пипетки, согнув под углом ее тонкий конец, предварительно разогретый в пламени горелки. Левой рукой слегка приоткрывают крышку, держа ее большим и указательным пальцем. Петлей, пипеткой или стеклянной палочкой наносят на поверхность среды посевной материал, после чего тщательно втирают его круговыми движениями шпателя до тех пор, пока шпатель не перестанет свободно скользить по поверхности среды, левой рукой при этом придерживают крышку и одновременно вращают чашку.

По окончании посева шпатель вынимают из чашки и закрывают крышку. Стеклянный шпатель помещают в дезинфицирующий раствор, а металлический прокаливают в пламени горелки.

Состав питательной среды

Небольшое количество посевного материала иногда его предварительно эмульгируют в стерильном изотоническом растворе или бульоне втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проводя петлей из стороны в сторону. Затем у того места, где закончились штрихи, агар прокалывают петлей, снимая избыток посевного материала. Оставшийся на петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют по всей поверхности среды. По окончании посева закрывают чашку и прожигают петлю.

Посев петлей на секторы. Чашку со стороны дна расчерчивают на секторы. Посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру. Необходимо следить, чтобы штрихи не заходили на соседний сектор. Тампон с посевным материалом вносят в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, вращая при этом тампон и чашку.

Примерно 1 мл 20 капель жидкой культуры если культура с плотной среды, ее эмульгируют в стерильном изотоническом растворе или бульоне наносят на поверхность агара и тщательно распределяют жидкость по поверхности среды.

Чашку слегка наклоняют и пипеткой отсасывают избыток культуры, выливая ее в дезинфицирующий раствор. Туда же помещают пипетку. Посев в толщу агара. Для перемешивания содержимого чашки ее слегка покачивают и вращают. Чашки оставляют на столе до застывания среды.

Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: Как правило, подходящие условия удается создать, тщательно воспроизведя условия природной обстановки.

Это прибор с двойными стенками, между которыми находится воздух или вода, подогреваемые электричеством. Он снабжен терморегулятором, автоматически поддерживающим нужную температуру, и термометром для контроля за температурой. Пробирки с посевами в штативах, проволочных сетках или банках устанавливают на полках термостата. Чашки в термостате должны стоять вверх дном. Чтобы воздух в термостате свободно циркулировал и нагрев был равномерным, полки в термостате делают с прорезями и плотно не загружают.

Чтобы не охладить культуры, термостат не оставляют надолго открытым. Лаборант обязан ежедневно регистрировать температуру в термостате и поддерживать чистоту в приборе, а при неисправности вызвать мастера. Свет подавляющему большинству микробов к ним относятся все патогенные не нужен - их культивируют в темноте. Однако для изучения пигментообразования, которое происходит активнее на рассеянном свету, культуры после термостата выдерживают дня при комнатном освещении.

Следует избегать попадания прямых солнечных лучей, действующих на культуры губительно. Жизнь микробов невозможна без влаги - питательные вещества проникают в клетку только в растворенном виде.

Это необходимо учитывать при культивировании на плотных средах: При культивировании микробов, особенно чувствительных к отсутствию влаги, например гонококков, в термостат ставят открытый сосуд с водой. Большинство патогенных микробов культивируют ч, но есть виды, растущие медленно до нед. Чтобы сохранить в них влагу, ватные пробки после посева заменяют стерильными резиновыми или надевают на них резиновые колпачки.

По потребности микробов в свободном кислороде их делят на аэробы и анаэробы. Обе группы требуют различных условий культивирования. Поступление кислорода, необходимого для культивирования аэробов и факультативных анаэробов, осуществляется при пассивной и активной аэрации. Пассивная аэрация - это культивирование на плотных и жидких средах в сосудах, закрытых ватными или ватно-марлевыми пробками, или в чашках Петри.

При таком культивировании микробы потребляют кислород, растворенный в среде, находящийся в сосуде над средой и поступающий через пробку. Пассивно аэрируемые культуры можно выращивать на поверхности или в тонком слое среды, куда проникает кислород воздуха. Активную аэрацию применяют при глубинном культивировании микробов, когда их выращивают в больших объемах среды. Чтобы достаточно снабдить кислородом такие культуры, их помещают в специальные качалки - постоянное перемешивание культуры обеспечивает соприкосновение ее с воздухом.

При культивировании в объемах жидкости, достигающих десятков и сотен литров, проводимом в приборах, называемых реакторами или ферментерами, воздух продувают через культуру при помощи специальных устройств. Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, так как их необходимо лишить доступа свободного кислорода воздуха.

Для этого удаляют воздух из питательной среды различными способами. Культивирование актиномицетов, грибов, микоплазм, L-форм, спирохет и простейших. Культивирование этих микроорганизмов принципиально сходно с культивированием бактерий. Для них разработаны специальные среды и подобраны режимы, соответствующие их потребностям.

Культивирование риккетсий и вирусов. Риккетсии и вирусы являются облигатными паразитами, т. Их культивируют в культурах тканей, организме экспериментальных животных, развивающихся куриных эмбрионах. Чистой культурой называют скопление микробов одного вида на плотной или в жидкой питательной среде. Существует ряд методов выделения чистой культуры в зависимости от свойств изучаемого материала и цели исследования. Обычно чистые культуры получают из изолированных колоний - обособленных скоплений микробов на плотной среде.

Считают, что чаще всего колония развивается из одной микробной клетки, т. Каплю исследуемого материала петлей, пипеткой или стеклянной палочной наносят на поверхность агара в чашке Петри. Шпателем втирают материал в поверхность среды; не прожигая и не перевертывая шпателя, производят посев на 2-й, а затем на 3-й чашке. При таком посеве на 1-ю чашку приходится много материала и соответственно много микробов, на 2-ю меньше и на 3-ю еще меньше.

Можно получить изолированные колонии при посеве петлей. Для этого исследуемый материал эмульгируют в бульоне или изотоническом растворе натрия хлорида. В 1-й чашке обычно бывает сплошной рост - выделить изолированную колонию не удается.

На поверхности агара во 2-й и 3-й чашке вырастают изолированные колонии. Их изучают невооруженным глазом, с помощью лупы, при малом увеличении микроскопа и иногда в стереоскопическом микроскопе см. Нужную колонию отмечают со стороны дна чашки и пересевают на скошенный агар. Посевы ставят в термостат. Делают мазок, окрашивают его и, убедившись в том, что культура чистая, приступают к ее изучению.

На этом выделение чистой культуры заканчивается. Выделенная из определенного источника и изученная культура, называется штаммом. При выделении чистой культуры из крови гемокультуры ее предварительно "подращивают" в жидкой среде: Так поступают потому, что в крови обычно мало микробов. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1: Колбы с посевом ставят в термостат.

Через сутки иногда через большее время в зависимости от выделяемой культуры из содержимого колб делают высевы на чашки для получения изолированных колоний. При необходимости повторяют высевы с интервалами дня. При выделении чистой культуры из мочи, промывных вод желудка и других жидкостей их предварительно центрифугируют в асептических условиях и засевают осадок.

Дальнейшее выделение чистой культуры производят обычным способом. В ряде методов для получения чистых культур используют биологические особенности выделяемого микроба. В научно-исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуры заведомо из одной клетки.

Такая культура называется клон. Для ее получения чаще всего пользуются микроманипулятором - прибором, снабженным инструментами иглами, пипетками микроскопических размеров. С помощью держателя под контролем микроскопа их вводят в препарат "висячая капля", извлекают нужную клетку одну и переносят ее в питательную среду. Изучение морфологии, подвижности, тинкториальных свойств см. Идентификация микроорганизмов очень важна при диагностике инфекций, установлении источников и путей ее передачи и в ряде других научно-практических исследований.

Разные виды микроорганизмов по-разному растут на средах. Эти различия служат для их дифференциации. Одни хорошо растут на простых средах, другие - требовательны и растут только на специальных.

Реферат: Питательные среды и их классификация

Микроорганизмы могут давать обильный пышный рост, умеренный или скудный. Культуры могут быть бесцветными, сероватыми, серо-голубыми. Культуры микроорганизмов, образующих пигмент, имеют разнообразную окраску: На плотных средах микроорганизмы в зависимости от количества посевного материала образуют или сплошной налет "газон" , или изолированные колонии.

Культуры бывают грубые и нежные, прозрачные и непрозрачные, с поверхностью матовой, блестящей, гладкой, шероховатой, сухой, бугристой. Колонии могут быть крупные мм в диаметре и больше , средние мм , мелкие мм и карликовые меньше 1 мм. Они различаются по форме, расположению на поверхности среды выпуклые, плоские, куполообразные, вдавленные, круглые, розеткообразные , форме краев ровные, волнистые, изрезанные.

В жидких средах микроорганизмы могут образовывать равномерную муть, давать осадок зернистый, пылевидный, хлопьевидный или пленку нежную, грубую, морщинистую. На полужидких средах при посеве уколом подвижные микробы вызывают помутнение толщи среды, неподвижные - растут только по "уколу", оставляя остальную среду прозрачной.

Культуральные свойства определяют, изучая характер роста культуры простым глазом, с помощью лупы, под малым увеличением микроскопа или пользуясь стереоскопическим микроскопом. Величину и форму колоний, форму краев и прозрачность изучают в проходящем свете, рассматривая чашки со стороны дна. В отраженном свете со стороны крышки определяют характер поверхности, окраску.

Консистенцию определяют прикосновением петли. Изучение морфологии микробов тоже служит для их дифференциации. Морфологию изучают в окрашенных препаратах. Устанавливают форму и величину клеток, их расположение в препарате, наличие спор, капсул, жгутиков. В окрашенных препаратах определяют отношение микробов к краскам тинкториальные свойства - хорошо или плохо воспринимают краски, как относится к дифференциальным окраскам в какой цвет окрашивается по Граму, Цилю - Нильсену и др.

Витальная прижизненная окраска позволяет установить подвижность, отдифференцировать живые и мертвые клетки, следить за их делением. Деление и подвижность можно изучать в нативных неокрашенных препаратах см.

Ферментативная активность микроорганизмов богата и разнообразна. По ней можно установить не только видовую и типовую принадлежность микроба, но и определить его варианты так называемые биовары.

Рассмотрим основные ферментативные свойства и их качественное определение. Расщепление углеводов сахаролитическая активность , т. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды. Поэтому эти среды названы "пестрый ряд". Микробы, не ферментирующие данный углевод, растут на среде, не изменяя ее. Наличие газа устанавливают по образованию пузырьков в средах с агаром или по скоплению его в "поплавке" на жидких средах.

Кроме того, сахаролитическую активность изучают на средах Эндо, ЭМС, Плоскирева. Микроорганизмы, сбраживая до кислоты находящийся в этих средах молочный сахар лактозу , образуют окрашенные колонии - кислота изменяет цвет имеющегося в среде индикатора.

Колонии микробов, не ферментирующих лактозу, бесцветны см. При росте микроорганизмов, образующих амилазу, на средах с растворимым крахмалом происходит его расщепление.

Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель раствора Люголя - цвет среды не изменяется. Нерасщепленный крахмал дает с этим раствором синее окрашивание. При росте на желатиновой среде микробов, ферментирующих желатин, среда разжижается. Характер разжижения, вызываемый разными микробами, различен рис. Микробы, расщепляющие казеин молочный белок , вызывают пептонизацию молока - оно приобретает вид молочной сыворотки.

При расщеплении пептонов могут выделяться индол, сероводород, аммиак. Их образование устанавливают с помощью индикаторных бумажек. Фильтровальную бумагу заранее пропитывают определенными растворами, высушивают, нарезают узенькими полосками длиной см и после посева культуры на МПБ помещают под пробку между нею и стенкой пробирки.

После инкубации в термостате учитывают результат. Помимо указанных сред, способность микроорганизмов расщеплять различные питательные субстраты определяют с помощью бумажных дисков, пропитанных определенными реактивами системы индикаторные бумажные "СИБ". Гемолитические свойства способность разрушать эритроциты изучают на средах с кровью. Жидкие среды при этом становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона рис.

При образовании метгемоглобина среда зеленеет. Выделенные и изученные культуры штаммы , представляющие ценность для науки или производства, хранят в музеях живых культур. Общесоюзный музей находится в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Задача хранения - поддержать жизнеспособность микроорганизмов и предупредить их изменчивость. Для этого надо ослабить или прекратить обмен в микробной клетке.

Один из самых совершенных методов длительного сохранения культур - лиофилизация - высушивание в вакууме из замороженного состояния позволяет создать состояние анабиоза. Высушивание проводят в специальных аппаратах. При этом, проходя через разогретые края трещин, воздух стерилизуется. Не забывайте, что в запаянной ампуле вакуум. Если воздух в нее попадает сразу через большое отверстие, может распылиться находящаяся в ампуле культура и произойти ее выброс. Дав войти воздуху, быстро пинцетом надламывают и удаляют верхушку ампулы.

Слегка обжигают отверстие и стерильной пастеровской пипеткой или шприцем вносят в ампулу растворитель бульон или изотонический раствор. Перемешивают содержимое ампулы и засевают на среды. Рост восстановленных культур в первых посевах может быть замедлен. Методы непродолжительного сохранения культур следующие: Культуру выращивают в агаре столбиком высотой см, заливают стерильным вазелиновым маслом слой масла примерно 2 см и хранят вертикально в холодильнике.

По мере надобности сохраняемый материал высевают на свежую среду. Изучите и опишите характер роста - культуры на скошенном агаре. Определите чистоту и морфологию культуры в окрашенном препарате. Пересейте культуру со скошенного агара на бульон и на дифференциально-диагностические среды.

Изучите и запишите в протокол характер роста культуры на этих средах и ее ферментативные свойства. Приспособления для мерного разлива сред. Изучение сахаролитической активности микроорганизмов. Гемолиз вокруг колоний, растущих на агаре с кровью. Питательные среды и микробиологическое исследование - Г. Кац Микробиологическое исследование - это выделение чистых культур микроорганизмов, культивирование и изучение их свойств.

Питательные среды Питательные среды являются основой микробиологической работы, и их качество нередко определяет результаты всего исследования. Требования, предъявляемые к средам Среды должны соответствовать следующим требованиям: При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста - витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать; Внимание! Микроорганизмы, как все живые существа, нуждаются в большом количестве воды. Окислительно-восстановительный потенциал большинства сред удовлетворяет требованиям к нему аэробов и факультативных анаэробов; 7 быть по возможности унифицированным, т.

Классификация сред Потребность в питательных веществах и свойствах среды у разных видов микроорганизмов неодинакова. Это вышеупомянутые МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода; б специальные среды служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

Например, для культивирования стрептококка к средам прибавляют сахар, для пневмо- и менингококков - сыворотку крови, для возбудителя коклюша - кровь; в элективные избирательные среды служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. При таком рН на ней активно размножается холерный вибрион, а другие микроорганизмы не растут; г дифференциально-диагностические среды позволяют отличить дифференцировать один вид микробов от другого по ферментативной активности, например среды Гисса с углеводами и индикатором.

При росте микроорганизмов, расщепляющих углеводы, изменяется цвет среды; д консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала; в них предотвращается отмирание патогенных микроорганизмов и подавляется развитие сапрофитов.

Каким требованиям должны удовлетворять питательные среды? Как классифицируют среды по исходным компонентам? Какие вещества служат для уплотнения сред?

Какие среды являются простыми или общеупотребительными и для чего их применяют? Какие среды называют сложными, что служит их основой?

На каких средах изучают ферментативную активность микробов? Задание Заполните форму, указав на какие группы подразделяют среды. Приготовление сред Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке ее в ржавых кастрюлях.

Общий вид реактора Внимание! Режим стерилизации сред 1 Жидкие среды с углеводами, белками или витаминами лучше стерилизовать с помощью бактериальных фильтров.

Рецепты приготовления простых основных сред и изотонического раствора натрия хлорида Изотонический раствор натрия хлорида. Рецепты приготовления сложных сред Среды с углеводами. Среды с кровью растапливать нельзя - кровь изменит свои свойства. Сухие среды Отечественная промышленность выпускает сухие среды разного назначения: При какой температуре плавятся и застывают агаровые среды?

Как должна быть подготовлена посуда, в которую разливают среды с углеводами и белками? Приготовьте агар с кровью и разлейте его в чашки Петри. Приготовьте из сухих порошков среды Эндо, ЭМС, Плоскирева и разлейте их в чашки Петри. Методы посевов Важным этапом бактериологического исследования является посев. Следите, чтобы среда не вылилась и не смочила пробку. Сосуды с засеянной культурой надписывают и ставят в термостат. Засеянные чашки подписывают со стороны дна и помещают в термостат дном вверх.

Нужны ли асептические условия во время посева? Как нужно обработать рабочее место по окончании посевов? Методы культивирования Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: Термостат Пробирки с посевами в штативах, проволочных сетках или банках устанавливают на полках термостата.

Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу. Методы выделения чистых культур микроорганизмов Чистой культурой называют скопление микробов одного вида на плотной или в жидкой питательной среде.

Этапы выделения чистой культуры: Пересевать можно только изолированные колонии. Для выделения чистой культуры широко применяют элективные среды. Изучение выделенных культур Изучение морфологии, подвижности, тинкториальных свойств см. Культуральные свойства Разные виды микроорганизмов по-разному растут на средах.

Морфологические свойства Изучение морфологии микробов тоже служит для их дифференциации. Ферментативная активность Ферментативная активность микроорганизмов богата и разнообразна. Молоко при росте микробов, сбраживающих лактозу, свертывается. Гемолиз вокруг колоний, растущих на агаре с кровью Сохранение культур Выделенные и изученные культуры штаммы , представляющие ценность для науки или производства, хранят в музеях живых культур.

Что входит в понятие "бактериологическое исследование"? Какой должна быть культура для такого исследования? Что такое колония микробов, культура, штамм, клон? Что входит в понятие "культуральные свойства микробов"? Изучите и опишите несколько колоний. Пересейте их на скошенный агар и на сектор.



Вас заинтересует:

Мелкие, слегка изогнутые в виде полумесяца, неспорообразующие палочки с закругленными концами, длиной мкм, шириной 0,,5 мкм.